菌种的比浊度与菌含量的干系及其使用_赢现金捕鱼

菌种的比浊度与菌含量的干系及其使用

泉源:/ 作者:余氯检测仪 工夫:2018-12-27

  摘 要:简介比浊法和活菌计数法测定菌液浓度的操纵步调和优缺陷,将比浊法与活菌计数法相联合,测定了罕见形式菌株比浊度对应的活菌计数浓度,为菌种浓度的预估提供一个疾速,精确,便捷的办法。

  要害词:菌液浓度;活菌计数;比浊度

  在微生物查验任务中,比方药品微生物限制反省办法验证、防腐效能测试、消毒液消毒结果验证、培育基实用性反省等等,经常需求参加肯定浓度的菌悬液,菌液浓渡过高或过低都将影响测试后果的精确性,因而控制菌液浓度是须要且要害的一步。测定菌液浓度的办法普通有三种,其一为活菌计数法,此法能精确判别菌液浓度,是现在国际的仲裁法,但是该法需求培育后计数,有分明的滞后性;其二为显微镜察看法,该办法实用于菌体较大的菌种浓度的测定,如霉菌和酵母菌,具无方便快捷的长处,但不实用于菌体粗大的菌种浓度的测定,有较大的范围性;三为比浊法,此法能疾速地判别菌液浓度,但后果为大略的估量值,差别巨细的菌种其构成的光密度差别,因而统一个比浊度,差别的菌后果差别较大,精确性不高。

  本文详细引见将比浊法和活菌计数法相联合的测定办法,测定了罕见形式菌株1麦氏比浊度(MCFARLAND)的菌液浓度,用于指点一样平常微生物检测任务中菌液浓度的疾速、精确测定,具有较强的适用代价。

  一、菌种及菌液的制备

  1.菌种

  金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC 6538)

  铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027)

  大肠埃希菌(Escherichia coli ATCC 8739)

  枯草芽孢杆菌( Bacillus subtilisATCC 6633)

  乙型副伤寒梵衲氏菌(Salmonella paratyphiCMCC(B)50094)

  白色念珠菌(Candida albicans ATCC 10231)

  黑曲霉(Aspergillusniger ATCC 16404)

  以上菌种从广东省微生物菌种收藏中心推销,经苏醒两代至五代内运用。

  2.菌液的制备

  (1)将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒梵衲氏菌的冻干管封口端(即阔别冻干粉的一端)在火焰上辨别灼烧后,敏捷滴加几滴灭菌水,使灼烧处管口裂口后,在生物平安柜内用灭菌镊子悄悄掰开裂口,辨别用0.5mL TSB溶冻结干菌种,然后将溶解后的冻干菌株全部转移到10mL TSB中,置36±1℃恒温培育箱中培育18~24小时,此为第一代菌种。在生物平安柜内辨别用无菌接种环挑取1接种环第一代上述菌悬液辨别划线接种于TSA中然后置于36±1℃恒温培育箱中培育18~24小时,此为第二代菌种,备用。

  (2)将白色念珠菌冻干管封口端在火焰上灼烧后,敏捷滴加几滴灭菌水,使灼烧处管口裂口后,在生物平安柜内用灭菌镊子悄悄掰开裂口,用0.5mL改进马丁液体培育基溶冻结干菌种,然后将溶解后的冻干菌株全部转移到10mL 改进马丁液体培育基中,置28±1℃恒温培育箱中培育24~48小时,此为第一代菌种。在生物平安柜内无菌接种环挑取1接种环第一代菌悬液划线接种于改进马丁琼脂培育基中。将新颖接种的改进马丁琼脂培育基置28±1℃恒温培育箱中培育24~48小时,此为第二代菌种,备用。

  (3)将黑曲霉冻干管封口端在火焰上灼烧后,敏捷滴加几滴灭菌水,使灼烧处管口裂口后,在生物平安柜内用灭菌镊子悄悄掰开裂口,用0.5mL含0.05%吐温80的0.9%无菌氯化钠溶液溶冻结干菌种,然后将溶解后的冻干菌株划线接种到改进马丁琼脂斜面培育基中,置28±1℃恒温培育箱中培育5~7天,此为第一代菌种。在生物平安柜内,用无菌接种环挑取1接种环第一代黑曲霉划线接种于改进马丁琼脂斜面培育基中。然后置28±1℃恒温培育箱中培育5~7天,此为第二代菌种。向第二代黑曲霉菌种管内参加5ml含0.05%吐温80的0.9%无菌氯化钠溶液,用无菌接种环将孢子洗脱,吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌试管内,备用。

  二、培育基和仪器

  1.培育基

  (1)商品培育基。

  胰卵白胨大豆肉汤(TSB)瓶装颗粒培育基

  胰卵白胨大豆琼脂培育基(TSA)

  改进马丁液体培育基

  改进马丁琼脂培育基

  0.5%无菌T.T.C

  以上培育基从广东环凯微生物科技有限公司推销商品培育基,按产品阐明书配制,灭菌后备用,此中TSA在运用前每100mL培育基参加1mL0.5%无菌T.T.C以便于细菌菌落的察看。

  (2)按配方配制的培育基。

  0.85%氯化钠

  0.9%氯化钠

  含0.05%吐温80的0.9%氯化钠

  以上培育基按配方配制,灭菌后备用。

  2.仪器

  生物平安柜(型号:SBSC1600ⅡB2)

  恒温培育箱(36±1℃,28±2℃)

  麦氏比浊仪(产品货号:WGZ-XT,消费商:捕鱼赢现金)

细菌捕鱼赢现金WGZ-XT
细菌
捕鱼赢现金WGZ-XT

  漩涡混淆器(型号:QA-1)

  三、菌种比浊度的测定及调理

  1.按仪器运用阐明书操纵,用规范麦氏比浊管检定仪器,当差别浓度的麦氏比浊管读数与规范麦氏比浊管标定的值在偏差容许范畴内时,方可停止下一步调。

  2.用0.85%无菌氯化钠作为空缺,调零。

  3.辨别用无菌接种环挑取1.2.1和1.2.2的平板上菌落过量,辨别在装有5mL 0.85%氯化钠的50mL锥形瓶瓶壁大将菌疏散(蘸取大批氯化钠后在瓶壁下去回划线,以便将菌疏散后使之易于混匀),然后用混淆器将菌液混匀备用。

  4.测定菌液比浊度,用相应菌种的菌落或氯化钠调理菌液的浓度,使菌液比浊度读数约为1MCFARLAND。

  四、活菌计数法计数各菌种1 MCFARLAND的菌含量

  1.金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒梵衲氏菌在生物平安柜内停止操纵。用0.85%无菌氯化钠作为浓缩剂,10倍梯度逐级浓缩至10-7,辨别顺次测定每种菌10-5~10-7三个浓缩倍数的菌落数。用移液枪及灭菌移液枪头各汲取1mL注入灭菌平皿中,每种菌每个梯度制备2个平行。注入约20mL,45℃~50℃的TSA培育基,随即转动平皿,使样品与培育基充沛混淆平均,待培育基凝结后,翻转平皿,置36℃±1℃恒温培育箱内培育48h,然落伍行菌落计数。先用肉眼察看,须要时可用缩小镜,点计菌落数,记下各平皿的菌落数后,求出每种菌的均匀菌落数,换算成每种菌1 MCFARLAND的菌含量。

  2.白色念珠菌和黑曲霉在生物平安柜内停止操纵,白色念珠菌用0.85%无菌氯化钠作为浓缩剂,黑曲霉用0.9%无菌氯化钠作为浓缩剂,10倍梯度逐级浓缩至10-6,每种菌辨别测定10-4~10-6三个浓缩倍数的菌落数。用移液枪及灭菌移液枪头各汲取1mL注入灭菌平皿,每种菌每个梯度制备2个平行。注入约20mL,45℃~50℃的改进马丁琼脂培育基,随即转动平皿,使样品与培育基充沛混淆平均,待培育基凝结后,翻转平皿,置28℃±1℃恒温培育箱内培育72h后,停止菌落计数。先用肉眼察看,须要时可用缩小镜,点计菌落数,记下各平皿的菌落数后,求出每种菌的均匀菌落数,换算成每种菌1 MCFARLAND的菌含量。

  五、后果与讨论

  每种菌独立反复三次实行,盘算三次反复实行每种菌1MCFARLAND所含的均匀菌落数。后果如下表:

  由表1可以看到:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒梵衲氏菌、白色念珠菌以及黑曲霉每1MCFARLAND接纳活菌计数法计数所得的菌液含量具有精良的重现性,三次独立反复实行测定的菌液含量绝对偏向小于50%。菌液的比浊度的菌液体的巨细有有关,菌体越大,相反比浊度的菌液含量越少。

  六、结论

  经过本实行证明,菌液含量(CFU/mL)与菌液的比浊度(MCFARLAND)有精良的相干性,可将实行用菌悬液调理至1MCFARLAND,经过活菌计数法确定实行用菌悬液的含量,以便较精确的预估实行用菌株浓度及所需求浓缩的级别。用平板制备的菌落,可接纳适合的浓缩剂作为比浊仪的空缺比较,调零。此办法特殊实用于枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞杆菌等在液体培育基上易构成块状或絮状物等不易打散的菌液的计数。若接纳液体培育基增菌的菌液则用相应的液体培育基作为比浊仪的空缺比较,调零。

  由于实行室间条件差别;培育基产地、批号差别;操纵职员与零碎偏差等缘由,统一菌种比浊度对应的菌液含量会有肯定差别,发起在统一实行室一旦有要素变革,应再重新确定菌种比浊度对应的菌液含量。

  参考文献:

  [1]朱艳静,李宇.测定菌体浓度的轻便办法[J].上海市产业微生物研讨所,2002,第36卷第4期:47-49.

  [2]国度药典委员会.中华人民共和国药典[ M ].四部.北京:中国医药科技出书,2015: 1105.

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