二氧化氯消毒剂对食用菌细菌性褐斑病病原菌的防治结果_赢现金捕鱼

二氧化氯消毒剂对食用菌细菌性褐斑病病原菌的防治结果

泉源:/ 作者:余氯检测仪 工夫:2018-07-27

  要害词:二氧化氯消毒剂;褐斑病;托拉斯假单胞杆菌;抑菌实验;食用菌

  细菌性褐斑病是一类在食用菌消费上广泛发作且危害严峻的病害,在平菇、双孢蘑菇、香菇、杏鲍菇、金针菇等多种食用菌上时常发作,尤其对平菇和双孢蘑菇危害最为严峻,发作率可以到达80%以上[1]。食用菌熏染该病害后菌盖外表呈现黄褐色或深褐色的雀斑,子实体得到食用代价,对食用菌消费形成严峻丧失[2]。细菌性褐斑病的病原菌是托拉斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasii),由其发生的托拉斯毒素作用于食用菌,使子实体发生病斑[3]。

  现在消费上用于防治细菌性褐斑病的化学药剂次要有漂白粉、农用链霉素等,但在实践防治进程中,结果不是非常抱负。二氧化氯消毒剂是一种广谱消毒剂,对细菌、真菌、病毒等病原微生物有很高的杀灭作用[4]。由于二氧化氯消毒剂具有高效低毒低残留的特点,在食用菌消费上常用来对接种室、培育室、出菇房停止空间熏蒸消毒,也用于出菇房喷雾,用来防治食用菌杂菌和病害。本实验展开二氧化氯消毒剂浓缩液对食用菌细菌性褐斑病病原菌托拉斯假单胞杆菌的克制结果研讨,为食用菌细菌性褐斑病防治提供迷信根据。

  1 实验资料与办法

  1.1 实验资料

  1.1.1 供试药剂 二氧化氯消毒剂由北京必洁仕环保新技术开辟有限责任公司消费。

  1.1.2 供试菌株和食用菌 实验中的3种供试托拉斯假单胞杆菌菌株:菌株JCM21583购自日本菌保中心;菌株JZB2120021、JZB2120022于2013年10月别离自糙皮侧耳的子实体,依据细菌形状特性、培育性状、16S rDNA、gyrB、rpoB基因序列剖析,判定为托拉斯假单胞杆菌。平菇双抗黑平、金针菇白金一号、双孢蘑菇As2796、香菇承德L18、杏鲍菇13号由本课题组收藏。

  1.1.3 培育基 LB培育基:含10 g胰卵白胨、5 g酵母提取物、10 g氯化钠,加蒸馏水定容至1 000 mL,用于托拉斯假单胞杆菌的培育。综合PDA培育基:含200 g马铃薯、20 g葡萄糖、20 g琼脂、3 g KH2PO4、1.5 g MgSO4、5 g卵白胨、10 mg维生素B1,加蒸馏水定容至1 000 mL,用于食用菌菌丝培育。

  1.2 实验办法

  1.2.1 摇瓶抑菌实验 细菌培育:在50 mL三角瓶中装入10 mL液体LB培育基,辨别接入100 μL D660 nm值为0.8的3种托拉斯假单胞杆菌菌液。

  药剂处置:在LB培育基中接入添加差别浓度的二氧化氯消毒剂浓缩液的托拉斯假单胞杆菌菌液。二氧化氯消毒剂应用0.22 μm无菌滤膜过滤后,用无菌水停止各浓度浓缩,设置浓缩2 500、5 000、10 000、20 000、40 000、80 000、160 000和320 000倍液8种浓度处置,每个浓度设3次反复,每个反复设4瓶。空缺比较参加等量无菌水。

  抑菌后果测定:各浓度处置在160 r/min、25 ℃摇床中振荡培育12 h后,应用分光光度计测定细菌菌体密度值,测定条件为:1倍光强、660 nm波长。

  1.2.2 二氧化氯消毒剂对食用菌菌丝生长的影响 药剂处置:PDA培育基冷却后参加二氧化氯消毒剂40 000倍液,充沛混匀后倒平皿,空缺比较参加等量无菌水倒平皿。

  食用菌菌丝培育:在添加二氧化氯消毒剂浓缩液的PDA培育基平皿上培育各种类食用菌。应用打孔器将供试各菌株定量接种在PDA培育基平皿的中心点,置于25 ℃恒温培育箱中培育,记载菌丝生长情况。每个食用菌种类设3次反复,每个反复设3皿。

  1.3 数据剖析

  接纳Duncans新复极差法剖析差别浓度二氧化氯消毒剂处置对3种病原菌防治结果和对食用菌菌丝生长影响的差别明显性。

  2 后果与剖析

  2.1 摇瓶抑菌实验

  摇瓶抑菌实验后果(表1)标明,二氧化氯消毒剂对食用菌褐斑病病原菌托拉斯假单胞杆菌有分明的克制作用。在较低浓缩倍数下(≤40 000倍),二氧化氯消毒剂对供试的3种托拉斯假单胞杆菌的克制率均在95%以上;浓缩倍数为 80 000 倍时,克制率均在90%以上。对菌株JZB2120021来说,2 500~80 000倍浓缩液间的克制率差别不明显,而与 16 000、32 000 倍液的克制率差别到达极明显程度;对菌株JZB2120022来说,2 500~40 000倍浓缩液间的克制率差别不明显,而与80 000、16 000和32 000倍液的克制率差别均到达极明显程度;二氧化氯消毒剂对菌株JCM21583的克制结果最好,2 500~40 000倍液对其完全克制。综合以上实验数据,运用40 000~80 000倍的二氧化氯消毒剂浓缩液可以无效地克制细菌性褐斑病病原菌,克制率在90%以上。

  2.2 二氧化氯消毒剂对食用菌菌丝生长的影响

  在摇瓶抑菌实验的根底上,选取了二氧化氯消毒剂 40 000 倍液添加到PDA培育基中,研讨该剂量消毒剂对食用菌菌丝生长的影响。从表2可以看出,二氧化氯消毒剂 40 000 倍液对5种食用菌菌丝生长没有发生影响。用 Duncans 新复极差法对实验后果停止剖析,消毒剂添加组与比较组的菌丝生长速率差别在0.05、0.01程度上均不明显。
  3 结论与 讨论

  褐斑病在天下各食用菌主产区均有发作,以年龄时节最为严峻,且病害一旦发作就会大面积熏染,不易防治。除化学防治之外,另有其他防治办法。赵肖静等应用褐斑病弱致病力菌株挑选失掉一株抗病结果好的平菇诱抗菌株,诱导抗病结果为66.73%[5];Fermor平分离了多株托拉斯假单胞杆菌

  二氧化氯消毒剂作为一种新型环保型消毒剂,在对食用菌接种园地和出菇房的消毒上具有很好的结果。近几年,一些学者也对二氧化氯消毒剂克制食用菌竞争性杂菌和病害方面停止了研讨。黄金宝等发明必洁仕二氧化氯消毒剂对食用菌杂菌如毛霉菌、木霉菌与链孢霉菌等有十分抱负的防治结果,而且用该消毒剂拌料,对平菇菌丝体萌生与生长有很好的促进作用[7-8];张涛涛等在平菇发作褐斑病后用二氧化氯消毒剂4 000倍液停止喷雾,可无效地控制褐斑病的伸张[9]。本研讨明白了二氧化氯消毒剂对褐斑病病原菌托拉斯假单胞杆菌最低克制浓度,40 000~80 000倍液即可无效地克制褐斑病病原菌,克制率在90%以上,为食用菌消费的平安用药提供了据支持。

  参考文献:

  [1]张瑞颖,胡丹丹,左雪梅,等. 平菇和双孢蘑菇细菌性褐斑病研讨停顿[J]. 动物维护学报,2007,34(5):549-554.

  [2]孙 婕,肖 扬,边银丙. 平菇褐斑病和软腐病发作纪律开端观察[J]. 中国食用菌,2011,30(4):66,68.

  [3]Rainey P B,Brodey C L,Johnstone K. Identification of a gene cluster encoding three high-molecular-weight proteins,which is required for synthesis of tolaasin by the mushroom pathogen Pseudomonas tolaasii[J]. Molecular Microbiology,1993,8(4):643-652.

  [4]刘 南,熊鸿燕. 二氧化氯消毒研讨停顿[J]. 重庆医学,2005,34(3):449-451.

  [5]赵肖静,石延霞,谢学文,等. 平菇细菌性褐斑病诱抗菌株挑选及诱抗结果[J]. 食用菌学报,2013,20(1):96-100.

  [6]Fermor T R,Lynch J M. Bacterial blotch disease of the cultivated mushroom Agaricus bisporus:screening,isolation and characterization of bacteria antagonistic to the pathogen(Pseudomonas tolaasii)[J]. Journal of Applied Bacteriology,1988,65(3):179-187.

  [7]黄金宝,林秀敏,陈文良,等. 必洁仕牌复方消毒剂防治杂菌的结果实验[J]. 食用菌,2006,28(2):49-51.

  [8]黄金宝,陈文良,张涛涛,等. 必洁仕牌消毒剂对食用菌及杂菌生长的影响[J]. 中国食用菌,2008,27(5):49-51.

  [9]张涛涛,董 丹,刘伟成,等. 必洁仕牌消毒剂防治平菇黄斑病药效实验[J]. 中国食用菌,2011,30(1):70-71.

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