浊度法测定12_赢现金捕鱼

浊度法测定12-去羟基阿奇霉素的效价

泉源:/ 作者:余氯检测仪 工夫:2019-01-04

  【择要】 目标 树立浊度法测定12.去羟基阿奇霉素效价的办法。办法 以肺炎克雷伯菌为实验菌,加菌量0.6%~1.0%(V/V),37℃±0.5℃培育4 h左右测定。后果 抗生素线性浓度为2.0~10.0 U/ml,二剂量法质料的均匀接纳率为101.2%,RSD为2.2%(n=9)。结论 本办法敏捷,疾速,影响要素较少,可作为测定12.去羟基阿奇霉素的效价的办法。

  【要害词】 效价;浊度法;12.去羟基阿奇霉素

  12-去羟基阿奇霉素是由红霉素C为质料,经过化学分解的办法分解的。本药物属广谱抗菌药, 对大少数革兰阴性细菌以及细胞内病原菌、支原体和衣原体等有较好的抗菌活性,对革兰氏阳性细菌也有肯定的抗菌活性。其抗菌活性较阿奇霉素为强。

  本药物属于新药,现在尚无含量测定办法。本文树立了浊度法测定12.去羟基阿奇霉素效价的办法。经过对12.去羟基阿奇霉素用比浊法测定其效价的研讨,即可直观反响药物的抗菌生机,又可在检测当天取得实行后果。

  1 仪器与试剂

  CBZ.1抗生素光度比浊法丈量仪、石英培育杯(厚度1 cm),北京潮声公司。

  肺炎克雷伯菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44 103],由中国药品生物成品检定所提供。

  阿奇霉素规范品(批号:130352.200405含量:936 U/mg)由中国药品生物成品检定所提供。12.去羟基阿奇霉素(河北省药品查验所自主分解)。

  抗生素检定培育基Ⅲ号(pH7.8,批号060403)由北京三药科技开辟公司提供(中国药品生物成品检定所监制);灭菌0.9%氯化钠溶液和磷酸盐缓冲溶液(pH7.8)均按中国药典2005年版二部附录配制。

  2 办法与后果

  2.1 一剂量法

  2.1.1 菌液的配制 取肺炎克雷伯菌的养分琼脂斜面培育物,接种于养分琼脂斜面上,在35℃~37℃培育18~22 h,临用时,用0.9%灭菌氯化钠溶液洗下;取新颖的菌悬液过量,加12%甲醛液1 ml杀灭,加生理盐水做得当的浓缩,使得其在580 nm波优点的吸取值为1.0,记载其浓缩所用的生理盐水的毫升数和1 ml 12%甲醛液的总毫升数,再将原菌液按此比例浓缩,即为实验菌液。取实验菌液0.6~1.0 ml加至培育基100 ml中,摇匀,为实行菌液。

  2.1.2 溶液的配制 规范品溶液取阿奇霉素规范品过量,精细称取,加乙醇溶解并用水浓缩成1 000 μg/ml的溶液,作为储藏液备用;精细量取储藏液过量,用磷酸盐缓冲溶液(pH7.8)进一步浓缩成2、4、5、8、10 U/ml的规范品溶液。

  2.1.3 培育与测定 取规范品溶液1.0 ml,参加灭菌培育管中,再参加实行菌液9.0 ml,置抗生素比浊法丈量仪内,于37℃培育。另取浓缩溶剂1.0 ml,加空缺培育基9.0 ml,混匀,作为空缺比较,仪器在线于530 nm的波优点测定各管肺炎克雷伯菌对数生临时内差别培育工夫下的吸光度值(A)。依据量反响平行线原理盘算供试品的效代价。

  2.2 二剂量法

  2.2.1 溶液的配制 ①规范品溶液精细量取阿奇霉素规范品储藏液过量,用磷酸盐缓冲溶液(pH7.8)浓缩制成4.0 U/ml和8.0 U/ml的规范品溶液;②供试品溶液取12.去羟基阿奇霉素过量,加乙醇溶解并用水浓缩成1 000 μg/ml的溶液,作为储藏液备用;精细量取12.去羟基阿奇霉素储藏液过量,用磷酸盐缓冲溶液(pH7.8)浓缩制成4.0 U/ml和8.0 U/ml的供试品溶液。

  2.2.2 菌液的配制 同2.1.2项下制备办法。

  2.2.3 培育与测定 同2.1.3项下办法。

  2.3 线性与范畴的测定 照抗生素微生物检定一剂量法测定,并以各组浓度规范品溶液所致菌液吸取度的值对溶液对数浓度停止线性回归,绘制规范曲线,盘算回归方程及相干系数辨别为:

  回归直线方程 Y=bX+a=.0.471 5 X+0.832 6相干系数r=0.995 5。

  后果标明:接纳规范品溶液停止一剂量法实验,在2~10 U/ml的浓度范畴里,呈精良的线性干系。

  2.4 接纳率实验 精细称取阿奇霉素规范品及一批已知含量的12.去羟基阿奇霉素质料样品,精细称定,加乙醇溶解并用水浓缩成800、1 000、1 200 U/ml的溶液,作为储藏液备用;精细量取储藏液过量,用磷酸盐缓冲溶液(pH7.8)浓缩制成3.2和6.4 U/ml、4.0和8.0 U/ml、5.0和10.0 U/ml的供试品溶液。在上述条件下测定,测得接纳率后果为均匀加样接纳率为101.2%,RSD为2.2%(n=9)。

  2.5 反复性实验 用已知含量的12.去羟基阿奇霉素样品一批,共测定6次,后果均匀含量为950 U/mg,RSD为1.8%。

  2.6 波动性调查 次要调查了抗生素溶液,即储备溶液和测定溶液波动性对测定后果的影响。

  后果标明:本品的浓溶液和点样用稀溶液安排冰箱保管可波动2 d,完全可以满意实行的需求。

  2.7 专属性调查 接纳接纳率实验停止验证,后果见2.4。

  2.8 样品测定 按上述浊度法测定法的二剂量法,停止实验,后果见表1。

  3 讨论

  3.1 测定条件的选择

  3.1.1 实行菌、培育基及加菌量的选择 12.去羟基阿奇霉素为广谱抗生素,对大少数革兰氏阴性细菌敏感,对革兰氏阳性细菌也有肯定的抗菌活性。曾选用金黄色葡萄球菌及肺炎克雷伯菌同时作实行,发明肺炎克雷伯菌关于本种类来说更为敏感。因而,本研讨选择肺炎克雷伯菌作为实行菌。培育基接纳国际外药典通用的抗生素检定培育基Ⅲ号,pH为7.0,灭菌后为廓清的液体培育基,合适肺炎克雷伯菌生长。

  菌液浓度:比浊侧定时,菌液过浓亦可使浓度.吸取度不可直线干系;但菌液浓渡过稀,则读数偏低,偏差增大。普通控制吸取度读数在0.3~0.7较为适合。

  3.1.2 测定工夫的选择 接纳实验菌的差别传代次数(3、4、5代)及差别加菌量(0.6~1.0%),以差别抗生素浓度实验,察看实验菌的生长曲线。发明,在4 h左右可到达所需浓度范畴(即培育肯定工夫后,吸光度应在0.3~0.7,剂距为2的相邻剂量间的吸光度差值不小于0.1)。

  3.1.3 工夫的分歧性 次要是使每管的培育工夫相称,实行时在试管中参加含实验菌液的培育基后,应立刻参加规范品溶液和供试品溶液,混淆平均。须要时可先将培育基冷却至2℃~4℃左右,再接种菌种,并在此温度下,将含菌培育基加至各试管中,可防止加注试管先后的偏差。培育停止时原应将各管同时放入冰浴中,并尽快参加甲醛溶液灭活,使各实验管的培育工夫分歧,现接纳仪器在线测定,则不需此项操纵。

  3.2 浊度法具有疾速(实验进程3~4 h,加上其他操纵,可在当天取得后果),易于操纵,后果用仪器测定,便于主动化操纵等长处;更紧张的是接纳液体培育基,消弭了多组分抗生素在固体培育基中分散差别的影响,使得实验的敏捷度高,精细度和精确度都较琼脂分散法好。但浊度法对实验仪器的功能及实验用具的要求较高(如:培育温度要求分歧,比色管的干净等),别的,任何影响液体培育基内微生物生长的要素都市影响抗生素效价的测定,这是其缺陷。因而,随着少量单组分抗生素接纳HPLC法测定含量,浊度法将成为不易接纳HPLC法的抗生素和多组分抗生素效价测定的主流。12.去羟基阿奇霉素。

  参考文献

  1 国度药典委员会.中华人民共和国药典(2005年版二部).化学产业出书社,2005:82.

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