浊度法测定硫酸小诺霉素效价的办法_赢现金捕鱼

浊度法测定硫酸小诺霉素效价的办法

泉源:/ 作者:余氯检测仪 工夫:2019-01-04

  [择要] 目标:树立浊度法测定硫酸小诺霉素效价的办法。办法:接纳浊度法测定硫酸小诺霉素的效价,并将浊度法与管碟法测定后果相比拟。

  后果:浊度法与管碟法测定后果分歧,浊度法测定后果可信限率较低。结论:本法轻便、快捷,可用于硫酸小诺霉素的效价测定。

  [要害词] 浊度法;硫酸小诺霉素;效价;管碟法

  硫酸小诺霉素为广谱氨基糖苷类抗生素,耳毒性和肾毒性较低,对6-N-乙酰酯酶抗药性菌无效,有弱小和疾速的抗菌才能,在医治由革兰阴性菌如铜绿假细胞菌、大肠埃希菌等惹起的熏染时,与内酰胺类抗生素有协同作用。现在该药物及其制剂接纳管碟法作为含量测定的办法,但管碟法为传统办法,虽能直观反应其体外抗菌才能,但是管碟法停止进程中影响要素颇多,并且耗费人力大,破费工夫长;浊度法既能补偿这些缺陷,又具有测定后果精细度高。本研讨树立浊度法测定硫酸小诺霉素效价的办法,即可直观反应药物的抗菌活性,又可在检测当天取得后果,敏捷、疾速,可作为硫酸小诺霉素效价的测定办法[1]。

  1 仪器与试药

  1.1 仪器

  抑菌圈丈量赢现金捕鱼ZY-300IV型、微生物比浊法测定仪WBS-100型(北京先驱威锋技术开辟公司);BP-211D剖析天平(SARTORIUS公司);UV-2401型紫外分光光度计(日本岛津)。

  1.2 试药

  大肠埃希菌[CMCC(B)44103];硫酸小诺霉素规范品(批号:130342-200703,效价:574 U/mg);培育基Ⅲ(批号:060403,中国药品生物成品检定所);硫酸小诺霉素质料药(山西省侯马市平阳制药厂);氯化钠,磷酸氢二钾,磷酸二氢钾,均为剖析纯。

  2 办法与后果

  2.1 实行条件

  2.1.1 大肠埃希菌悬液的制备取大肠埃希菌[CMCC(B)44103]的养分琼脂斜面培育物,接种于养分琼脂斜面上,在35~37℃培育20~22 h,然后用灭菌水将菌苔洗下,并加灭菌水浓缩,使其在580 nm波优点的吸取度为1.0。

  2.1.2 实验菌悬液参加量的选择 取大肠埃希菌悬液,参加到培育基中,制成含菌浓度辨别为1%、2%、3%、4%、5%的培育基,培育2.5 h,在580 nm处测定吸取度,后果含3%菌液浓度在3%时,吸取度为0.52,契合要求,故选3%的菌液浓度。

  2.1.3 抗生素溶液配制精细称取规范品和质料药过量,加灭菌水溶解,配制成1 000 U/mg的溶液,精细量取此溶液过量,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH=7.0)浓缩至终极浓度为10 U/mg和20 U/mg(剂间比为1∶2)。

  2.1.4 抗生素溶液的分装 取已灭菌的石英比色管16支,辨别为ds14支、ds24支、dT14支、dT24支,辨别标志,精细量取规范溶液ds1、ds2及dT1、dT2各1.0 ml,按编号参加相应比色管中。

  2.1.5 含菌培育基的分装在培育基中参加肯定量实验菌(3%),用已灭菌的刻度吸管分装至比色管中,每管分装9.0 ml,立刻振摇,混淆平均。

  2.1.6 培育、丈量与盘算运用WBS-100微生物比浊仪,恒温培育,定时振荡,在线丈量,盘算后果[2]。

  2.2 线性范畴调查

  称取规范品过量,加灭菌水制成1 000 U/mg的溶液,辨别精细汲取此液过量,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH=7.0)浓缩成8、10、12、16、20、24、30、35、40 U/mg的溶液。辨别精细量取上述各溶液1.0 ml,置灭菌比色皿中,每个浓度3管,辨别参加含菌培育基9.0 ml,立刻摇匀,在浊度测定仪中培育3.5 h,以培育基为空缺,在580 nm处测定吸取值,以吸取值(A)为纵坐标,以浓度(C)的对数为横坐标,停止线性回归,回归方程为Y=2.634 2-1.294 6lgC(r=0.998 2),阐明在40~80 U/mg浓度范畴内,抗生素浓度的对数与吸取值线性干系精良[3]。在线性浓度范畴内选取硫酸小诺霉素的上下剂量在24、12 U/mg所测定的A值根本在0.4~0.6范畴内,上下计量为2∶1,可作为效价测定的抗生素溶液浓度。培育基接种菌量约为3%,菌悬液在580 nm处的吸取度为约1.0,实验后果较为抱负。

  2.3 精确度与精细度调查

  2.3.1 接纳率实验选择 90%、100%、110%三点停止接纳率实验。①90%样品溶液制备:辨别精细汲取上述规范品溶液(1 000 U/mg)4.5、9.0 ml,用pH=7.0的磷酸盐缓冲液浓缩成上下浓度辨别为9、18 U/mg的抗生素溶液。②100%样品溶液制备:辨别精细汲取上述规范品溶液(1 000 U/mg)5、10 ml,用pH=7.0的磷酸盐缓冲液浓缩成上下浓度辨别为10、20 U/mg的抗生素溶液。③110%样品溶液制备:辨别精细汲取上述规范品溶液(1 000 U/mg)5.5、11.0 ml,用pH=7.0的磷酸盐缓冲液浓缩成上下浓度辨别为11、22 U/mg的抗生素溶液。辨别取上述溶液,依照浊度法操纵,后果接纳率辨别为100.51%、100.27%、100.34%。

  2.3.2 反复性实验 取统一批样品,配制6份供试品溶液,停止测定,于1 d内完成,后果6份供试液效价均值为562 U/mg,RSD为5.8%。提示该抗生素溶液不宜久放,工夫要素对测定后果影响较大,实验时溶液应临用新制。

  2.3.3 样品含量测定取硫酸小诺霉素规范品及样品过量,精细称定,用灭菌水制成1 000 U/mg的溶液,辨别精细汲取此液过量,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH=7.0)浓缩制成10、20 U/mg浓度的上下剂量溶液,上下计量剂间比为2∶1,辨别精细量取上述溶液各1.0 ml,置灭菌比色管中,各6管,辨别参加3%大肠埃希菌液培育基9.0 ml,立刻摇匀,在浊度测定仪中培育3.5 h。按“2.1.6”项下办法测定。阴性比较:pH=7.0磷酸盐缓冲液1.0 ml,加9.0 ml未接种实行菌的培育基。辨别用浊度法与管碟法的二剂量法对5批硫酸小诺霉素质料药停止测定,并测定后果停止比拟(n=5),后果见表1。

  表 1 浊度法与管碟法的测定后果比拟

  质料药标示效价:574 U/mg

  对样品及质料药用比浊法和管碟法测得的含量和可信限率FL(%)停止t查验,后果无明显性差别(P>0.05),比浊法的可信限率优于管碟法[4]。

  3 讨论

  实验菌必需具有波动性,关于实行来说,它是决议性要素,因而在菌悬液的制备进程中,需严厉控制菌种斜面的质量和菌种培育的温度和工夫。培育温度为37℃,工夫应不少于22 h,菌液应质细、平均[5]。

  实验菌的波动性实行用培育基必需光彩浅、质廓清,敏捷度应高,应能包管实验菌生长精良。特殊要控制pH值,若pH值不合适,实验菌生长迟缓,在规则工夫内构成的浊度达不到要求。若添加培育工夫,则实行精细度随之较差[6]。

  实验中严厉避免微生物和抗生素的净化绝对而言,微生物净化对浊度法的影响要比管碟法要大,浊度法培育时,比色管必需干净,其他抗生素或净化菌与实验菌混淆在一同同时生长,如许将招致生物反响混乱,形成同浓度各管的吸取度差异增大,可信限率明显增高,影响效价测定后果的精细度与精确度[7-8]。

  实验中温度对后果的影响较大,应坚持温度恒定、平均,各管如受热不敷平均,则平行实验的后果欠好,以是各管应随机安排,以消弭部分温度不平均对细菌生长的的影响。定时振摇可使细菌平均生长,上下浊度分歧,延长实行工夫。

  实验中培育工夫控制得能否精确也十分紧张,实验时各管最好按肯定工夫距离参加含菌培育基,丈量时也按统一工夫距离丈量,控制实验偏向较小在较小的范畴内(±5%)。

  实行标明,接纳浊度法与管碟法测定硫酸小诺霉素质料,后果分歧,浊度法操纵方便,重现性较好,可以用于硫酸小诺霉素质料的效价测定。本次研讨还调查了浊度法测定硫酸小诺霉素制剂效价的可行性,后果标明浊度法完全可以用于测定该种类片剂,实行中若将上下浓度抗生素溶液过滤,则可减小辅料的影响,后果的可信限率将更低。

  [参考文献]

  [1]国度药典委员会.中华人民共和国药典[S].二部.北京:化学产业出书社,2005:附录82.

  [2]武德仁,毛影.硫酸粘菌素效价测定办法的讨论[J].中国药师,2007,9(12):100-101.

  [3]冯向东,高光伟.浊度法测定吉他霉素的效价[J].东南药学杂志,2008, 23(5),270-271.

  [4]黄赐煌,王红梅,邱涵,等.浊度法测定阿奇霉素的效价[J].海峡药学,2007,19(12):45-47.

  [5]王金龙,高燕霞,刘云,等.浊度法测定四环素的效价[J].药物剖析杂志,2007,27(12):1988-1990.

  [6]刘英,崔春英,席德荣,等.比浊法主动测定麦白霉素制剂的效价[J].中国药学杂志,2007,42(8):1251-1254.

  [7]张菁,杨梁,姜开国.浊度法测定地红霉素效价[J].药物剖析杂志,2007, 27(3):342-344.

  [8]姜开国,高燕霞,韩斌.浊度法测定磷霉素钙胶囊的效价[J].中国药师,2008,11(11):1271-1272.

——本文由捕鱼赢现金科技整剃头布,内容供参考,若有侵权,请联络删除,谢谢!上海捕鱼赢现金科技有限公司为你提供捕鱼赢现金(浊度计)在线捕鱼赢现金余氯仪余氯赢现金捕鱼产业在线pH计cod测定仪pH计等多种水质检测仪水质赢现金捕鱼,欢送您前来选购,捕鱼赢现金科技真挚为您效劳!

上一篇:SPR高浊度污水的处置

下一篇:动态浊度法定量检测清开灵注射液中细菌内毒素
水质检测赢现金捕鱼厂家,扫一扫,微信报价
扫一扫微信询价
扫一扫微信二维码,取得水质检测赢现金捕鱼优惠价钱

分享到

取消